ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶标記(jì)。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶标記(jì)的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。

這種測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑：

（1）固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）

（2）酶标記的抗原或抗體，稱爲"結合物"（conjugate）

（3）酶反應的底物。根據試劑的來源和标本的情況以及檢測的具體條件，可設計出各種不同類型的檢測方法

雙抗體夾(jiā)心法是檢測(cè)抗原常用的方法。

操作步驟如下：

1） 将特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。

2） 加受檢标本，保溫反應。标本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體複合物。洗滌除去其他未結合物質。

3） 加酶标抗體，保溫反應。固相免疫複合物上的抗原與酶标抗體結合。*洗滌未結合的酶标抗體。此時固相載體上帶有的酶量與标本中受檢抗原的量相關。

4） 加底物顯色。固相上的酶催化底物成爲有色産物。通過比色，測知标本中抗原的量。

雙抗體夾心法适用於(yú)測(cè)定二價或二價以上的大分子抗原，但不适用於(yú)測(cè)定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。

【雙抗夾心法測抗體】

反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處爲以酶标抗原代替酶标抗抗體。此法中受檢标本不需稀釋，可直接用於(yú)測定，因此其敏感度相對高於(yú)間接法。乙肝标志物中抗HBs的檢測常採(cǎi)用本法。本法關鍵在於(yú)酶标抗原的制備，應根據抗原結構的不同，尋找合适的标記方法。

【直接法測抗體】

間接法是檢測(cè)抗體常用的方法。其原理爲利用酶标記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）以檢測(cè)與固相抗原結合的受檢抗體，故稱(chēng)爲間接法。

操作步驟如下：

1）将特異性抗原與固相載體聯結，形成固相抗原。洗滌除去未結合的抗原及雜質。

2）加稀釋的受檢血清，保溫反應。血清中的特異抗體與固相抗原結合，形成固相抗原抗體複合物。經洗滌後，固相載體上隻留下特異性抗體，血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去。

3）加酶标抗抗體。可用酶标抗人Ig以檢測總抗體，但一般多用酶标抗人IgG檢測IgG抗體。固相免疫複合物中的抗體與酶标抗體抗體結合，從而間接地标記上酶。洗滌後，固相載體上的酶量與标本中受檢抗體的量正相關。

4）加底物顯色

本法主要用於(yú)對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優點是隻要變(biàn)換包被抗原就可利用同一酶标抗抗體建立檢測相應抗體的方法。