人胚肺細胞 （WI-38）

人胚肺細胞 (WI-38)
細胞介紹：
WI-38人二倍體細胞系來自3個月的正常胚胎肺組織。該細胞系是首株用於人類疫苗制備的人二倍體細胞系。培養液中添加TNFalpha可以促進細胞生長。
 
細胞培養步驟：
1)培養基及培養凍存條件準備：
1.準備 MEM 培養基(MEM:GIBCO);北美胎牛血清(United States， GIBCO )，10%; PS 1%。

2.培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度爲70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。z〇cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。
2.細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
 
人胚肺細胞 (WI-38)對於貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)於培養瓶中，置於37°C培養箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養瓶後加2ml*培養基 終止消化。按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加l-2mL培養基後吹勻。将細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3.細胞凍存：待細胞生長狀态良好時，可進行細胞凍存。
 
下面T25瓶爲例；
細胞凍存時，棄去培養基後，PBS清洗瓶底1-2次後加入lml胰酶，細胞變圓脫落後，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計數闆計數。1000RPM離心5分鍾去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度爲10%。加入DMSO後迅速混勻，按每lml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好标識。本公司按每個凍存管細胞數目大於1X106個細胞凍存。将凍存管置於程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以後轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
 
注意事項：
收到細胞後，若發現幹冰己揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯。
所有動物細胞均視爲有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台内操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丢棄。
 
細胞特性：
1)來源：正常肺
2)形态：成纖維細胞
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測爲陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
人胚肺細胞 (WI-38)運輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞後，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min後，於潔淨操作台棄去上清，加入推薦使用的培養基後轉移至l〇cm培養皿或者T25培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀态良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
細胞用途：僅供使用。