人食管癌細胞（TE-5）

人食管癌細胞(TE-5)
本公司的細胞培養操作規程，供參考
1)培養基及培養凍存條件準備：
1.準備 RPIVM-1640 培養基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛血清，10%。
2.培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37°C，培養箱濕度爲70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
 
2)細胞處理：
複蘇細胞：将含有lmL細胞懸液的凍存管迅速放入37°C水浴中（水面要低於凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，加入lmL培養基後吹勻。然後将所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液並檢查細胞密度。
細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
 
人食管癌細胞(TE-5)對於貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)於培養瓶中，置於37°C培養箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養瓶後加入3ml此細胞的培養基終止消化。輕輕吹打後吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，加入lmL培養液後吹勻。移入到事先準備好的含有5ml培養基的T-25培養瓶中或含有14ml培養基的T-75培養瓶中培養。
 
細胞凍存：待細胞生長狀态良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理並進行細胞計數。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行，後的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數後離心，用血清重懸浮，加DMSO至終濃度爲10%。加入DMSO後迅速混勻，按每lml的數量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數目大於1X106個細胞凍存。
 
注意事項：
收到細胞後，若發現幹冰己揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯。
所有動物細胞均視爲有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台内操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丢棄。
 
細胞特性：
1)來源：食管癌
2)形态：上皮細胞樣，貼壁生長
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測爲陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
人食管癌細胞(TE-5)細胞接受後的處理：
1.收到細胞後，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。
2.請先在顯微鏡下確認細胞生長狀态，去掉封口膜並将T25瓶置於37°C培養約 2-3h〇
3.棄去T25瓶中的培養基，添加6ml本公司附帶的*培養基。
4.如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代，傳代培養用6ml本公司附帶的*培養基。
5.接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得電聯。
細胞用途：僅供使用。