人葡萄球菌PCR檢測試劑盒

産品介紹：

産品名稱：人葡萄球菌PCR檢測試劑盒

英文名稱(chēng)：Staphylococcus hominisPCR

準備物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升

稀釋(shì)液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升

産(chǎn)品說明書(shū)                                     1份

注意事項：

1．基礎程序。

2．擴增溫度和延伸溫度。

3．反應時間。

4．循環次數。

5．PCR 反應(yīng)液的配制。

6．PCR技術(shù)的基本原理。

7．PCR的反應動力學。

8．PCR擴增産物。

9．PCR反應體(tǐ)系與反應條(tiáo)件。

反應五要素：

參(cān)加PCR反應(yīng)的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模闆和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 産物的特異性取決於引物與模闆DNA互補的程度。人葡萄球菌PCR檢測試劑盒理論上，隻要知道任何一段模闆DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可将模闆DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：

①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用爲(wèi)20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp爲宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%爲宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶(dài)。ATGC*随機分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出現二級結構，避免兩條引物間互補(bǔ)，特别是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，産(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特别是末及倒數第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)緻PCR失敗(bài)。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位點(diǎn)， 被擴增的靶序列*有适宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處(chù)。

⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量産(chǎn)生所需要的結果爲好，引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。