酶聯免疫吸附實驗（ELISA）是一種廣泛應用測定樣本中的蛋白、抗體或激素的的免疫分析技術。ELISA将蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體固定在固相載體上，再加入含有待測抗體，形成一個抗原抗體的複合物。如果該抗體已經用酶标記瞭，可以直接來檢測抗原的量，如沒有，則可以用酶标二抗來測定抗原的量。加入酶的底物，底物産生出現的顔色深淺和樣本中的抗原呈正比的關系，依此原理計算出樣本的抗原總量和濃度。結合ELISA原理，ELISA分爲4種方法，每種方法優缺點不同。下面通蔚生物爲大家詳細介紹一下。

直接法

将抗原直接固定在固相載體上，加入酶标記(jì)的抗體，即可測(cè)定抗原總量。

優勢：直接elisa法操作簡(jiǎn)單(dān)，因不需要二抗，避免交叉反應

缺勢：實驗中一抗需酶标，並(bìng)不是所有抗體都需要酶标，成本相對(duì)較高

間接法

此方法和直接ELISA法區别不是很大，多瞭(le)酶标二抗，用酶标二抗去辨識一抗來測(cè)定抗原的量。

優勢：二抗可以加強信号

缺勢：交叉反應發(fā)生機(jī)率較高

雙抗體夾心法

被檢測(cè)的抗原包被在2個抗體之間，其中一個抗體将抗原固定於(yú)固相載體上，既捕捉抗體。另一個是檢測(cè)抗體，此抗體可以用酶标記後直接測(cè)定抗原的量；或者不标記，在使用酶标二抗來測(cè)定抗原的量。這2種抗體要小心選擇，才可避免交叉反應或競争相同抗原結合部位。

優勢：高靈(líng)敏、高專一性、抗原無須事先純(chún)化。

缺勢：抗原一定要擁有兩個(gè)以上抗體結(jié)合部位

競争法

樣本裏的抗原和純(chún)化並(bìng)固定在固相載體上的抗原一起競争相同的抗體，當樣品中的抗原越多，就可以結合越多的抗體，而固定的抗原就隻能結合較少的抗體，

優勢：可适用比較(jiào)不純(chún)的樣本，而且數據再現性很高。

缺勢(shì)：整體的敏感性和專一性都較(jiào)差。

上述是ELISA實驗4種較爲常見的方法優缺點(diǎn)對(duì)比。每種方法對(duì)應不同實驗需求和樣本，才能事半功倍。