ELISA實驗會做瞭，ELISA标準曲線應該(gāi)怎麽繪制呢？有不少客戶(hù)向我們咨詢，在繪制ELISA試劑盒标準曲線時應該(gāi)注意什麽？我司就這一問題做出以下詳細講解。

一、做标準曲線樣品檢(jiǎn)測(cè)時需要注意

1、設置标準曲線樣品的标準濃度範圍要有一個比較大的跨度，並(bìng)且要能涵蓋你所要檢測(cè)實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在标準曲線濃度範圍之

内，包括上限和下限。而對(duì)於(yú)呈S型的标準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾(jǐ)乎成直線的範(fàn)圍内。

2、採(cǎi)用倍比稀釋法配制标準曲線中的标準樣品濃度，這樣就能夠(gòu)保證标準樣品的濃度不會出現較大的偏離。

3、樣品的濃度等指标是根據标準曲線計算出來的，所以首先要把做标準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則後(hòu)面的實驗結果無從(cóng)談起。

4、檢測(cè)标準樣品時，應按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確(què)性。

5、标準曲線的樣品數一般爲7個(gè)點(diǎn)，但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。

6、做出的标準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變(biàn)動，但一般來說，相關系數R至少要大於(yú)0.98，對於(yú)有些實驗，至少要0.99甚至是0.999。

二、選擇什麽方程去拟合

用於免疫檢測的所謂“标準曲線"其實稱(chēng)爲拟合曲線比較合适。免疫檢測(cè)時标準點（可以是倍比稀釋的，也可以不是）濃度如果和相應的吸光度

（OD）值如果能夠(gòu)呈現直線關系，這時可以通過EXELL等方便的獲得拟合曲線，進而推算出樣品的濃度值。但我們做免疫檢測(cè)很少有

時候能夠(gòu)有這麽理想的情況(kuàng)，标品濃度和相應OD值往往是"S"型的曲線關系，這時就不能用直線拟合的方式瞭(le)，而對(duì)拟合方法進行選擇就是必要的瞭(le)。

關於(yú)标準曲線的拟合方式，直線、二次曲線、三次曲線、指數、對(duì)數等雖都可用於(yú)ELISA及其它生物學反應中的曲線(xiàn)拟合，但都隻适用於(yú)曲線(xiàn)的一部分，有的适用於(yú)前半段，有的适用於(yú)後半段，有的适用於(yú)中間一段，而Logistic曲線則對曲線的全部都有較好的适用性。當(dāng)然，如果用於(yú)定量，還是在中間一段較好。這些方法雖然沒有一種方法可以通用，但也都可以用。關鍵在於(yú)你的标準曲線做到瞭(le)S形的哪一部分，你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部分。在S曲線的低濃度部分可以用乘幂方程很好的拟合，中低濃度部分可以用直線方程，中間部分可用對(duì)數方程，而中後段可用四參(cān)數。

目前國(guó)際上普遍免疫檢測(cè)拟合方式是“四參(cān)數邏輯拟合"，用這種拟合方式往往能夠比較精確(què)的反映濃度和吸光度的曲線關系，從而進一步比較正確(què)的獲(huò)得樣品中待測(cè)物質的濃度值。

其實，在一個長的區間内，Logistic應該(gāi)都能拟合得較爲理想。但並(bìng)不是說它就是萬能的。事實上不僅是ELISA，其它很多生物學反應都是S形曲線，也都可以用Logistic曲線拟合。但建模型是一回事，而用它來定量是另一回事。如果用來定量，S形曲線的中間(jiān)段（較陡處(chù)）是比較好的，而兩端的平坦部分計(jì)算誤差會(huì)大，有時甚至會(huì)很大。

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