1. 主要試劑(jì)與儀器：倒置相差顯微鏡(jìng)（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。

2. hek-293細胞的複蘇培養傳(chuán)代及凍(dòng)存

3. 細胞的複蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,並(bìng)不斷的搖動,使之迅速融化。 将溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒後打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管内,稍微吹打混勻,然後1000rpm 5min,去除上清,加入适量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種於(yú)25cm2培養瓶内，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養。

4. 細胞傳代 原代培養的hek－293細胞48h換液1次，細胞長(zhǎng)至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，将培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，爲使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然後加入倍量的培養基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳(chuán)代擴增細胞。

5. 細胞形态的觀察 在倒置顯微鏡下觀察並(bìng)記錄細胞的生長(zhǎng)情況及形态特征。

6. 細胞的計數 常規消化細胞，待細胞變(biàn)圓、脫壁並(bìng)浮起，加入少量培養基離心，再用pbs重懸並(bìng)吹打制成細胞懸液。在細胞計數闆蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數闆四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。

7. 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞，以0.25％消化成單(dān)細胞懸液，計數後分别接種於(yú)12個25cm2培養瓶中，每兩小時随機取出3瓶細胞，吸除培養基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100％，計算貼壁率。

8. 生長曲線 取指數生長(zhǎng)期的細胞用消化制成單(dān)細胞懸液，以1×104/孔接種於(yú)24孔闆，每孔加入1ml培養基。每天随機取3孔，計數每孔細胞的數目並(bìng)計算平均值。連續計數10d，繪制細胞生長曲線