ELISA結果如何判斷？

ELISA試驗結果的判斷(duàn)主要根據所做實驗的說明書進行,現一般按S/CO進行判斷(duàn),其中S爲樣品吸光度,CO爲K*陰性對(duì)照,K值依據所做實驗有所不同。如果沒有光度計(酶标儀)靠肉眼判斷(duàn),則陰、陽性判斷(duàn)主要靠經驗。ELISA常用結果判定方法如下：

1.  定性測定

定性測(cè)定的結果判斷(duàn)是對受檢标本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單(dān)回答，分别用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該标本在該測(cè)定系統中有反應。"陰性"則爲無反應。用定性判斷法也可得到半定量結果，即用滴度來表示反應的強度，其實質仍是一個定性試驗。在這種半定量測(cè)定中，将标本作一系列稀釋後進行試驗，呈陽性反應的最高稀釋度即爲滴度。根據滴度的高低，可以判斷标本反應性的強弱，這比觀察不稀釋标本呈色的深淺判斷爲強陽性、弱陽性更具定量意義。

2. 間接法和夾心法

這類反應的定性結果可以用肉眼判斷(duàn)。目視标本也無色或近於(yú)無色者判爲陰性，顯色清晰者爲陽性。但在ELSIA中，正常人血清反應後常可出現呈色的本底，此本底的深淺因試劑的組成和實驗的條件不同而異，因此實驗中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應爲不含受檢物的正常血清或類似物（見3.6）。在用肉眼判斷結果時，更宜用顯色深於(yú)陰性對照作爲标本陽性的指标。目視法簡捷明瞭(le)，但頗具主觀性。在條件許可下，應該用比色計測定吸光值，這樣可以得到客觀的數據。先讀出标本（sample，S）、陽性對照（P）、和陰性對照（N）的吸光值，然後進行計算。計算方法有多種，大緻可分爲陽性判定值法和标本與陰性對照比值法兩類。

3. 用此法判斷結果要求實驗條件十分恒定，試劑的制備(bèi)必須标準化，陽性和陰性的對照品應符合一定的規格，須配用精密的儀器，並(bìng)嚴格按規定操作。陽性判定值公式中的常數是在這特定的系統中通過對大量标本的實驗檢測而得到的。現舉某種檢測HBsAg的試劑盒爲例。試劑盒中的陰性對照品爲不含HBsAg的複鈣人血漿，陽性對照品HBsAg的含量标明爲P=9±2ng/ml.每次試驗設2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值後，先計算陰性對照A值的平均數（NCX）和陽性對照A值的平均數（PCX），兩個平均數的差（P-N）必須大於(yú)一個特定的數值（例0.400），試驗才有效。3個陰性對照A值均應≥0.5×NCX，並(bìng)≤1.5×NCX，如其中之一超出此範圍，則棄去，而已另兩個陰性對照重新計算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上範圍，則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算： 陽性判定值=NCX+0.05 标本A值＞陽性判定值的爲陽性，小於(yú)陽性判定值的爲陰性。應注意的是，式中0.05爲該試劑盒的常數，隻适合於(yú)該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。根據以上叙述可以看出，在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質控作用，試劑變質和操作不當均會産生"試驗無效"的後果。

4. 在實驗條件（包括試劑(jì)）較難保證恒定的情況下，這種判斷(duàn)法較爲合适。在得出标本（S）和陰性對照（N）的A值後，計算S/N值。也有寫作P/N的，這裏的P不代表陽性(positive)，而是病人（patient）的縮寫，不應誤解。爲避免混淆，更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中，有些作者定出S/N爲陽性标準，現多爲各種測(cè)定所沿用。實際上每一測(cè)定系統應該用實驗求出各自的S/N的阈值。更應注意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質的人血清。有的試劑盒中所設陰性對照爲不含蛋白質或蛋白質含量較底的緩沖液，以緻反應後産(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此，這類試劑盒規，如N<0.05（或其他數值），則按0.05計算，否則将出現假陽性結果。