動物細胞培養的必需條件:
在所有的細胞離(lí)體培養中,最困難的是動(dòng)物細胞培養。下面是它所需要的特殊條件。
⑴血清:動物細胞離體培養常常需要血清。常用的是小牛血清。血清提供生長(zhǎng)必需因子,如激素、微量元素、礦物質和脂肪。在這裏,血清等於(yú)是動物細胞離體培養的天然營養液。
⑵支持物:大多數動(dòng)物細胞有貼壁生長(zhǎng)的習慣。離體培養常用玻璃,塑料等作爲支持物。
⑶氣體交換:二氧化碳和氧氣的比例要在細胞培養過程中不斷(duàn)進行調(diào)節,不斷(duàn)維持所需要的氣體條件。
動物細胞培養的培養步驟:
注:所有步驟應在無菌無毒的超淨工作台進行。蛋白酶處(chù)理時間不宜過長(zhǎng)。
取離體的動物組織,器官或細胞,剪碎並(bìng)加入yi蛋白酶分解成單(dān)個細胞,配置形成細胞懸液。
制備(bèi)動(dòng)物細胞培養液體培養基(需加入血清,保證無菌無毒),将細胞接種至培養基,放入二氧化碳培養箱中進行初代培養。
當細胞增殖達到一定程度,出現接觸抑制現象時,用yi蛋白酶再次處理,並(bìng)用細胞懸液吹打貼壁生長(zhǎng)的細胞。進行細胞計數。
依照計數結果,分瓶培養,進行傳(chuán)代培養。獲(huò)得細胞系或細胞株。