在運用ELISA方法測(cè)定抗體方面，通常所用的方法稱爲間接法，也是目前常用的方法，其原理：間接法首先用抗原包被於(yú)固相載體，這些包被的抗原必須是可溶性的，或者至少是極微小的顆粒，經洗滌，加入含有被測(cè)抗體之标本，再經孵育洗滌後，加入酶标記抗抗體，(對人的标本來說即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM)，再經孵育洗滌後，加底物顯色，底物降解的量，即爲欲測(cè)抗體的量，其結果可用目測(cè)或用分光光度計定量測(cè)定。

操作步驟：

1. 将抗原按5μg/ml稀釋於(yú)碳酸鹽緩沖(chōng)液(pH 9.6)，100μl /孔，4℃過夜。

2. 次日PBS－T清洗4次(快1慢3，間(jiān)隔5分鍾(zhōng))。

3. 加2％BSA封閉(bì)室溫(wēn)1h，200μl /孔。

4. 陽性對照從10ug/ml，做倍必稀釋，待測血清從1：50做倍比稀釋，預試驗後確(què)定稀釋倍數及陽性對照的起始濃度及稀釋數量(以可以做标準曲線爲參(cān)數)，室溫1h。

5. PBS－T清洗4次(快1慢3，間(jiān)隔5分鍾(zhōng))。

6. 加入1：3000(不同公司有不同的推薦(jiàn)稀釋度)PBS-T稀釋的HRP标記(jì)的山羊抗人IgG，100μl /孔，室溫1h。

7. PBS－T清洗4次(快1慢3，間(jiān)隔5分鍾(zhōng))。

8. 顯色，100μl /孔，顔色變(biàn)深後中止顯色，2M硫酸在BIO-RAD酶标儀上讀(dú)數，可用ABTS，OPD，TMB等。