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植物安排制備(bèi)基因組(zǔ)DNA操作方法
更新時間:2023-04-26   點(diǎn)擊(jī)次數:1246次

1. ELISA試劑盒收取10~50 g 新鮮的植物安排。

2. 植物安排用冷的無菌水洗刷、吸幹,放人液氮中凍(dòng)結,用研缽(bō)和研杵研成細粉。

3. 将凍結的細粉放入250 ml 的離心瓶中,立即參(cān)加抽提緩沖(chōng)液約每克植物5~10 ml,輕輕攪拌混勻。

4. 參(cān)加十二烷基肌氨酸鈉使終濃度達1%,於(yú)溫育1~2 h。

5. 用JA-14轉子4℃,5 500 g 離心10min 保存上清,必要時重複(fù)此歩驟以除掉殘(cán)渣。

6. 加人0.6體積(jī)yi丙醇,混合,假如看不見沉積(jī),於(yú)-20℃放置30 min,用JA-14轉子4℃,7 500 g 離心15 min,棄上清。

7. ELISA試劑盒沉積用9 ml TE緩沖液重懸,參加9.7 g 固體氯化铯,混勻,冰上放置30 min,用JA-14轉子,7 500 g 離心10 min,保存上清。

8. 參(cān)加0.5 ml 10 mg/ml 的溴化乙錠(dìng),冰上放置30 min,4℃ 7500 g  離心10min.

9. 将上清轉入兩個(gè)5 ml 的快封超離心管中,並(bìng)封口。

10. 用VTi80轉子20℃ 525 000 g 離(lí)心4 h,或20℃,300 000 g 離(lí)心,用15号針頭和注射器收集帶(dài)。

11. 用氯化豔飽(bǎo)滿的yi丙醇重複抽提DNA以除掉溴化乙錠(dìng)。

12. 參(cān)加2體積(jī)水和6體積(jī)100%乙醇,混勻,-20℃放置1 h,用JA-20或JA-21轉子4℃,7500 g 離心10 min。

13. 沉積用TE緩沖(chōng)液重懸,參(cān)加1/10體積的3 mol/l 乙酸鈉和2體積的100%乙酵重懸,重複離心。

14. 沉積曬幹(gàn)後用TE緩沖(chōng)液重懸ELISA試劑盒。

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