做任何實驗,我們能做的就是盡zui大的努力減少實驗誤差,在ELISA試劑盒實驗操作中,誤差分有系統誤差、偶然誤差、過失誤差,而一個小小的誤差主意能夠影響到實驗,那麽怎樣才能縮小實驗誤差呢?除瞭需要細心之外,還有一些需要重點
ELISA試劑盒注意的地方
① 檢驗技師應具備(bèi)從(cóng)事實驗室操作的基本素質和實踐經驗。能熟練操作實驗儀器、器械,具有一定總結和分析問題的能力,對實驗中出現的意外情況能及時妥善解決。
② 使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準確(què)與否對定量檢測(cè)尤爲重要。
③ 仔細閱讀(dú)說明書,嚴格按照說明書要求進行規範化操作。不同批号的試劑不可混用。值得改進的地方,反複試驗確(què)定成立後才能改進。
④ 洗滌cedi,如若洗闆不cedi,酶結合物本底顯色會呈現假陽性。洗滌液要新鮮,現用現配,陳舊的洗滌液會出現本底增高現象,也可能出現假陽性。
⑤ 嚴控反應時間,反應時間過長(zhǎng),酶失活;反應時間過短,酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合,物結構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。
⑥ 注意試劑(jì)盒保存期,過(guò)保存期的試劑(jì)不能使用。
⑦ 評估試劑的實用性,試劑的穩定與否,對(duì)準確(què)率的高低到頭重要。在試劑啓用前,應進行陰、陽對(duì)照及樣品反複比照試驗,判定試劑符合要求後方可使用。
⑧ 嚴格掌握顯色時間,顯色時間過短,加入終止液反應終止後,底物結合物的量過少,易出現假陰性。超過顯色要求時間後顯色,應判爲假陽性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑後立即顯色,不可報(bào)陽性,這可能是本底顯色的結果。
⑨ 加樣要準確(què)、快速。如果加樣不準確(què),酶物的量不能確(què)定,直接影響顯色結果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關,所以加樣應慎重。要求在一定時間内加樣完畢(bì)的實驗,如果加樣遲緩,便出現誤差,而且試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效。