1、包被用抗原或抗體的濃度，包被的溫度和時間，包被液的pH等應根據試驗的特點和材料的性質而選定。抗體和蛋白質抗原一般採用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作爲稀釋液，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作爲稀釋液的。通常在ELISA試劑盒闆孔中加入包被液後，在4-8℃冰箱中放置過夜，37℃中保溫2小時被認爲具有同等的包被效果。包被的适當濃度随載體和包被物的性質可有很大的變化，每批材料需通過實驗與酶結合物的濃度協調選定。一般蛋白質的包被濃度爲100ng/ml-20ug/ml。

2、封閉是否必要，取決於ELISA試劑盒的模式及具體的實驗條件。並非所有的ELISA固相均需封閉，封閉不當反而會使陰性本底增高。一般說來，雙抗體夾心法，隻要酶标記物是高活性的，操作時洗，不經封閉也可得到滿意的結果。特别是用單抗腹水直接包被時，因其中大量非抗體蛋白在包被時同樣也吸附在固相表面，業已起到瞭類似封閉劑的作用。但在間接法測定中，封閉一般是不可少的。包被好的ELISA闆幹燥後放入密封袋或錫袋中，在低溫可保存數月。

3、封閉（blocking）是繼包被之後用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。抗原或抗體包被時所用的濃度較低，吸收後固相載體表面尚有未被占據的空隙，封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙，從而排斥在ELISA試劑盒其後的步驟中幹擾物質的再吸附。封閉的手續與包被相類似。常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明膠作爲封閉劑的。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑，其zui大的特點是價廉，可以高濃度使用（5%）。高質量的速溶食用低脂奶粉即可直接當作封閉劑使用，但由於(yú)奶粉的成份複雜，而且封閉後的載體不易長期保存，因此在試劑盒的制備(bèi)中較少應用。

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以上淺談ELISA試劑盒的包被與封閉條件，您知道瞭嗎？