對於ELISA試劑盒檢測樣品的處理方法很多實驗新手還不是很清楚，咨詢這方面問題的客戶也較多，以下爲上海酶聯生物技術部整理出的ELISA試劑盒檢測(cè)樣品的處(chù)理方法：
 

　　1、 血清
 

　　血清是zui常用於ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單。
 

　　用無熱原、無内毒素的試管或離心管採集血液标本，将試管或離心管室溫放置2小時或4℃過一夜，使血清析出。(将試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g離心20分鍾，仔細收集上清。建議将血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反複凍融。
 

　　採血過程中應避免溶血，因爲紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質，在以HRP爲标記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導緻檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染，因爲菌體内可能含有内源性的HRP從而導緻檢測的假陽性。
 

　　2、 血漿
 

　　用含抗凝劑的採血管或離心管採集血液标本，标本採集後30min内4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿。将上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反複凍融。避免使用溶血或高血脂的标本。
 

　　常用的抗凝劑爲EDTA、肝素鈉和枸橼酸鈉等，檢測時還應仔細閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。
 

        3、 細(xì)胞培養(yǎng)上清

 

　　取細胞培養上清到離心管，1000×g離心20min，除去細胞碎片及雜質，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反複凍融。
 

　　4、 細胞裂解液
 

　　吸去培養闆内的培養基，用胰酶消化細胞，加适量培養基将細胞從培養闆上吹下來。懸浮細胞可省略。
 

　　收集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養基，用預冷的PBS潤洗3次。
 

　　加入适量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔闆一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
 

　　将樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反複凍融幾次，使細胞充分裂解。也可将樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。
 

　　4℃ 10000×g 離心10min，除去細胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反複凍融。
 

　　5、組織勻漿液
 

　　将組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質。
 

　　将組織塊稱重，記錄後剪碎，碎塊應盡量小，便於勻漿得更充分。
 

　　将組織按一定的比例加入預冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿，勻漿時置於冰上或冰浴中。(通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿，例如1g的組織樣本對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要适當調整，檢測後計算樣品濃度時應乘以相應的稀釋倍數)
 

　　吸取勻漿液到離心管，4℃ 5000×g 離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反複凍融。
 

　　6、 尿液、唾液等其他液體生物樣本
 

　　1000×g離心20min，取上清即可檢測。
 

　　總的來說，因爲ELISA隻能檢測可溶性蛋白的含量，所以應保證所有樣本均爲澄清的液體，沉澱或懸浮物都應離心去除。
 

　　爲瞭(le)保證檢測的準確性，保存於(yú)-20℃或-80℃的樣本在1~6個月内檢測；4℃保存的樣本應在1周内進行檢測。另外，還應保證樣本不含NaN3，因爲NaN3會抑制HRP的活性，從而導緻假陰性的結果。