ELISA實驗常見(jiàn)問題及解決方法新發(fā)布
更新時間：2021-12-03 點(diǎn)擊(jī)次數：1977次
一直以來ELISA試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到瞭廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導緻顯色不全、花闆等結果。上海酶聯生物現将操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結於下，以期給各位同行帶來一些啓發，提高試驗質量。
下面分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因，並給出相應的解決辦法。
一、選擇試劑
選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前将試劑在室溫下平衡30-60分鍾。
二、加樣
1、血清或血漿标本分離不好即進行加樣；
2、手工操作中，加樣闆過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長(特别是室内溫度較高時)；
3、加完标本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法：
1、标本爲血清：将血液先自然存放1-2小時後，再用3000rmp離心15分鍾;标本爲血漿：必須使用含抗凝劑的血液标本收集管，採血後必須立即颠倒採血管混合5-10次，放置一段時間後，3000rpm離心15分鍾;若在幾天内檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置於-20℃的低溫冰箱内。
2、加樣後及時放入孵箱。
3、加酶試劑後用吸水紙在酶标闆表面輕拭吸幹。
4、如果採用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他後處理儀器加酶試劑。
5、标本較多時，請分批操作。
三、孵育
1、孵育時未貼封片或加蓋，使标本或稀釋液蒸發，吸附於孔壁，難於清洗*;
2、孵育時間人爲延長，導緻非特異性結合緊附於反應孔周圍，難以清洗*。
解決辦法：
1、貼封片或加蓋；
2、按說明步驟嚴格控制操作時間。
四、洗闆(bǎn)
1、採用手工洗闆，孔與孔之間液體交叉。
2、採用半自動洗闆機洗闆時，洗液量不足，導緻洗闆不*；洗闆針堵塞，抽吸不*;洗闆不暢，導緻洗闆效果差。
3、反應闆過多造成洗闆等待時間長。
解決辦法：
1、保證洗液注滿各孔，洗闆針暢通，洗完闆後在吸水紙(選擇幹淨、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍幹；
2、合理安排，或多用幾台洗闆機。
五、顯色
1、顯色劑配制後放置時間過長或使用過期顯色劑；
2、加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
解決辦法：1、顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；
2、加樣時保持顯色劑不外流；
3、A、B液應避免接觸金屬器械。
六、終止
可能原因如加終止液時産生較多氣泡，導緻假陽性增加。所以在加終止液時應避免産生氣泡。
七、讀闆
如讀闆時闆底不清潔等。應保證酶标闆清潔。所以在整個操作過程中保證酶标闆不接觸次氯酸；盡可能實現ELISA檢測标準自動化，有效提高檢測質量。
在實際操作中，除瞭選擇優良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室内質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份标本，才能保證檢測質量。上海酶聯生物擁有全自動酶标儀，這對於實現ELISA試劑盒标準化檢測、提高檢測質量起到瞭重要作用。
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