1、血清

A、DNA-陽離子脂質體複合物構成時不能含血清，由於血清會影響複合物的構成。

B、一般細胞對無血清培養能夠耐受幾個小時沒問題，轉染用的培養液能夠含血清也能夠不加，但血清一度曾被以爲會降低轉染效率，轉染培養基中參加血清需求對條件進行優化。

C、關於對血清缺乏比較敏感的細胞，能夠運用養分豐厚的無血清培養基，或許在轉染培養基中運用血清。對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議運用轉染試劑。有條件的話，能夠用無血清培養基代替PBS洗細胞兩遍，注意洗的時分要輕，靠邊際緩緩參加液體，然後不要吹吸細胞，而是滾動培養闆讓液體滾動在細胞表面。假如洗的太厲害，細胞又損失一部分，加瞭脂質體後，細胞受影響就更大瞭，死亡細胞會增多。

2、抗生素(PS)

抗生素，比如青黴素和鏈黴素，是影響轉染的培養基添加物。這些抗生素一般關於真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加瞭細胞的通透性，使抗生素能夠進入細胞。這降低瞭細胞的活性，導緻轉染效率低。所以，在轉染培養基中不能運用抗生素，甚至在預備轉染前進行細胞鋪闆時也要防止運用抗生素。這樣，在轉染前也不用潤洗細胞。關於穩定轉染，不要在選擇性培養基中運用青黴素和鏈黴素，ICIN選擇性抗生素的競争性抑制劑。另外，爲瞭保證無血清培養基中細胞的健康成長，運用比含血清培養基更少的抗生素量。

3、細胞狀況

這點非常重要，不要急於求成，必定要讓細胞處於jia的成長狀況再做。有文獻說傳代不要超越17代。細胞複蘇後的3代左右時細胞狀況hao，不要用傳瞭許多代的細胞去做，細胞的形态都會發生改變。大多數已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養包含瞭表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在試驗室中保存數月和數年後會經曆突變，總染色體重組或基因調控改變等而演化。這會導緻和轉染相關的細胞行爲的改變。假如随時刻發現這種改變，消融一管新鮮的細胞可能會恢複原先的轉染活性。

4、細胞鋪闆密度

用於轉染的jia細胞密度根據不同的細胞類型或使用而異。因轉染試劑對細胞有毒害效果，細胞太少，容易死。一般轉染時，貼壁細胞密度爲70%-90%，懸浮細胞密度爲2-4×106細胞/ml，確保轉染時細胞沒有長滿或處於靜止期。由於轉染效率對細胞密度很敏感，所以在不同試驗間堅持一個根本的傳代步驟很重要。

5.啓動子的選擇

取得高轉染活性所需選擇的啓動子依賴於(yú)選用的細胞系和要表達(dá)的蛋白。CMV啓動子在大多數細胞類型中能夠取得高表達(dá)活性。同其他啓動子，如SV40和RSV(勞斯肉瘤病毒)相比，在BHK-21中其活性高。這三種病毒啓動子在T細胞來曆的細胞系，如Jurkat中組成表達(dá)水平較低。

6、DNA量

高質量的DNA關於進行的轉染至關重要。轉染的質粒必定純度好、濃度高、無内毒素。濃度不要低於0.35ug/ul。産物表達，48小時mRNA表達gao；72h蛋白表達gao。