酶标闆在酶聯免疫吸附試驗中, 參(cān)與免疫學反應的抗原、抗體、标記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類、濃度和離子強度、pH值和反應溫度、時間等條件起著(zhe)關鍵作用。
此外,作爲載體的固相聚苯乙烯(Polystyrene)表面對(duì)抗原、抗體或抗原抗體複合物的吸附也起著(zhe)重要作用。
根據(jù)酶标闆與蛋白和其它分子結合能力的不同可以将酶标闆分爲以下幾(jǐ)類:
1、高結合力酶标闆:
酶标闆經表面處理後蛋白結合能力大大增強,可達300~400ng IgG/cm2,主要結合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶标闆可提高敏感性,並(bìng)可相對減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處爲較易産生非特異性反應。抗原或抗體包被後,以非離子去污劑無法有效地封閉(bì)未結合蛋白的部位,需使用蛋白作爲封閉(bì)劑。
2、中結合力酶标闆:
酶标闆經表面疏水鍵(jiàn)被動(dòng)與蛋白結合,适合作爲分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結合能力爲200~300ng IgG/cm2。
由於(yú)該類酶标闆所具有的僅與大分子結合的特性,适用於(yú)作爲未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛在的非特異性叉反應。該類闆可以惰性蛋白或非離子去污劑作爲封閉(bì)液。
3、氨基化酶标闆:
酶标闆經表面改性處(chù)理後擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶标闆适合作爲小分子蛋白的固相載體。使用合适的緩沖(chōng)液和pH值,其表面可通過離子鍵與帶負電荷的小分子結合。
由於(yú)其表面的親水特性和可通過其它交聯劑共價結合的能力,可用於(yú)固定溶於(yú)Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類闆的缺陷爲由於(yú)降低瞭(le)疏水性,一部分蛋白分子無法結合;
此外,其表面需有效地封閉(bì)。由於(yú)親水和共價的表面特性,使用的封閉(bì)液必須能夠與非反應性氨基基團和所選擇的交聯劑中任何功能基團發生作用。