細胞傳代:
當細胞在細胞培養瓶内長滿達到80%時就要傳代,一傳二,24小時後再傳代。48小時傳就不好瞭(le),如果在24小時後細胞沒有長到80%,應該換新的培養基,不然,培養基變(biàn)黃,細胞脫落。
細胞消化:
将細胞培養瓶豎立放置,吸走培養基,如果培養基中的脫落細胞較多,說明細胞現在很容易脫落,隻要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%),來回輕微晃動(dòng)培養瓶直到細胞*脫落,加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清),混勻,不能吹打,分裝2瓶,如果細胞沒長(zhǎng)滿就脫落,則隻需加入5mlMEM,不分裝。
如果培養瓶中的細胞貼壁較牢固,培養基上清沒有細胞脫落碎片,且細胞長(zhǎng)滿達(dá)到80%以上,吸走培養基,加入5ml的PBS+EDTA(0.02%),迅速輕微晃動,豎立培養瓶,吸走,加入1ml0.05%胰酶,37度消化不超過3min,細胞*消化脫壁,取出加入10ml培養基輕微吸打混勻,分裝2瓶。
培養基:
MEM(GIBCO)+10%胎牛血清(杭州四季青)+雙(shuāng)抗