人鼻咽癌病毒（NPCV）酶聯(lián)免疫分析試劑(jì)盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

96T

使用目的：

本試劑盒用於測定人血清、血漿(jiāng)及相關(guān)液體樣本中鼻咽癌病毒（NPCV）表達(dá)。

實驗原理

本試劑(jì)盒應用雙抗體夾心法測(cè)定标本中人鼻咽癌病毒（NPCV）表達(dá)。用純化的人鼻咽癌病毒（NPCV）抗體(tǐ)包被微孔闆，制成固相抗體，可與樣品中鼻咽癌病毒（NPCV）相結合，經洗滌(dí)除去未結合的抗原和其他成分後(hòu)再與HRP标記的鼻咽癌病毒（NPCV）抗體(tǐ)結(jié)合，形成抗體-抗原-酶标抗體複(fù)合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍(lán)色，並(bìng)在酸的作用下轉化成終的。用酶标儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較(jiào)，從(cóng)而判定标本中人鼻咽癌病毒（NPCV）的存在與否。

人鼻咽癌病毒（NPCV）酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成

标本要求 

1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融

2．不能檢(jiǎn)測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

人鼻咽癌病毒（NPCV）酶聯(lián)免疫分析操作步驟

1.編(biān)号：将樣品對(duì)應微孔按序編(biān)号，每闆應設陰性對(duì)照2孔、陽性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶标試劑(jì)，其餘各步操作相同）

2.加樣：分别在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然後在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部，盡量不觸(chù)及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.溫(wēn)育：用封闆膜封闆後(hòu)置37℃溫育30分鍾。   

4.配液：将30倍濃縮洗滌(dí)液用蒸餾水30倍稀釋後備(bèi)用

5.洗滌(dí)：小心揭掉封闆膜，棄(qì)去液體，甩幹，每孔加滿洗滌(dí)液，靜置30秒後棄去，如此重複(fù)5次，拍幹。

6.加酶：每孔加入酶标試(shì)劑(jì)50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯(xiǎn)色：每孔先加入顯(xiǎn)色劑(jì)A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鍾。

10.終止：每孔加終止液50μl，終(zhōng)止反應(yīng)（此時藍色立轉）。

11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應在加終止液後(hòu)15分鍾以内進行。

人鼻咽癌病毒（NPCV）酶聯(lián)免疫分析操作程序總結：

計算和結果判定：

  試(shì)驗有效性：陽性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰(yīn)性對(duì)照平均值≤0.10

  臨(lín)界值（CUT OFF）計(jì)算：臨(lín)界值=陰(yīn)性對(duì)照孔平均值+0.15

  陰(yīn)性判定：樣(yàng)品OD值< 臨(lín)界值（CUT OFF）者爲(wèi)鼻咽癌病毒（NPCV）陰性

  陽(yáng)性判定：樣(yàng)品OD值≥ 臨(lín)界值（CUT OFF）者爲(wèi)鼻咽癌病毒（NPCV）陽性

。

人鼻咽癌病毒（NPCV）酶聯(lián)免疫分析注意事項

1．操作嚴格按照說明書進(jìn)行，本試劑(jì)不同批号組分不得混用。

2．試劑盒從(cóng)冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後(hòu)方可使用，酶标包被闆開封後(hòu)如未用完，闆條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋(shì)時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

4.封闆(bǎn)膜隻(zhǐ)限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶标儀讀數爲準，使用雙波長檢測(cè)時，參(cān)考波長爲630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuán)染物處(chù)理。終止液爲2M的硫酸，使用時必須注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月