雞甲狀腺素(T4)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測範圍：96T

3µg/L - 80µg/L

使用目的：

本試劑盒用於(yú)測(cè)定雞血清、血漿及相關液體樣本中甲狀腺素(T4)含量。

實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中雞甲狀腺素(T4)。用純化的雞甲狀腺素(T4)抗體包被微孔闆，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入甲狀腺素 (T4)，再與  HRP标記的甲狀腺素 (T4)抗體    ，形成抗體 -抗原-酶标抗體複合物。TMB 在 HRP  酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成終的。顔色的深淺和樣品中的甲狀腺素(T4)呈正相關。用酶标儀在 450nm波長下測定吸光度（OD值），通過标準曲線計算樣品中雞甲狀腺素(T4)濃度。

試劑盒組成

标本要

1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過(guò)（HRP）活性。

雞(jī)甲狀腺素(T4)酶聯免疫分析試劑(jì)盒操作步驟

1.  标準品的稀釋：本試劑(jì)盒提供原倍标準品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同）、标準孔、1待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然後再加待測樣品 10μl（樣品終稀釋度爲 5倍）。加樣将樣品加於酶标闆孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封闆膜封闆後置 37℃溫育30分鍾。

4.配液：将 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋後備用。

5.洗滌：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒後棄去，如此重複 5次，拍幹。

6.加酶：每孔加入酶标試劑 50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾。

10.終止：每孔加終止液    50μl，終止反應（此時藍色立轉）。

11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液後 15分鍾以内進行。

操作程序總：

計算

以标準物的濃(nóng)度爲橫(héng)坐标， OD值爲縱坐标，在坐标紙上，根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用标準物的濃度與  OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式，将樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即爲樣品的實際濃度。

雞(jī)甲狀腺素(T4)酶聯免疫分析試劑(jì)盒注意事項

1．試劑盒從(cóng)冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鍾後(hòu)方可使用，酶标包被闆開封後(hòu)如未

用完，闆條(tiáo)應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有

析出，稀釋時(shí)可在浴中加溫助溶，洗滌(dí)時(shí)不影響。

3．各步加樣均應使用加樣器，並(bìng)經常校對其準確(què)性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在 5分鍾内，如标本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測(cè)定的同時做标準曲線，好做複(fù)孔。如标本中待測(cè)物質含量過高（樣本  OD值大於标準品孔孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請後乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封闆(bǎn)膜隻(zhǐ)限一次性使用，以避免交叉。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuán)染物處(chù)理。

9．本試(shì)劑(jì)不同批号組分不得混用。

保存條件及有效期

1．試(shì)劑(jì)盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月