大鼠 (Rat) 白細胞介素-8（IL-8）ELISA 檢測試劑盒

本試劑(jì)僅供研究使用  标本：血清或血漿(jiāng)

試驗原理：

IL-8試劑(jì)盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知IL-8濃度的标準品、未知濃度的樣品加入微孔酶标闆内進行檢測(cè)。先将IL-8和标記的抗體同時溫育。洗滌後，加入親和素标記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然後加入底物A、B，和酶結合物同時作用。産生顔色。顔色的深淺和樣品中IL-8的濃度呈比例關系。

試劑盒内容及其配制

自備材料

1．蒸餾水。

2．加樣(yàng)器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．振蕩(dàng)器及磁力攪(jiǎo)拌器等。

安全性

1．避免直接接觸(chù)終止液和底物A、B。一旦接觸(chù)到這些液體，請盡快用水沖(chōng)洗。

2．實(shí)驗中不要吃喝、抽煙(yān)或使用化妝品。

3．不要用嘴吸取試劑(jì)盒裏(lǐ)的任何成份。

大鼠 (Rat) 白細胞介素-8（IL-8）ELISA 檢測試劑盒操作注意事項

1．試劑應按标簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢複(fù)到室溫。稀稀過後的标準品應丢棄，不可保存。

2．實(shí)驗中不用的闆條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變(biàn)質。

3．不用的其它試劑(jì)應包裝好或蓋(gài)好。不同批号的試劑(jì)不要混用。保質前使用。

4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶(dài)金屬部分的加樣器。

5．使用幹(gàn)淨的塑料容器配置洗滌(dí)液。使用前充分混勻試劑盒裏的各種成份及樣品。

6．洗滌(dí)酶标闆時應充分拍幹(gàn)，不要将吸水紙直接放入酶标反應孔中吸水。

7．底物A應揮發，避免長(zhǎng)時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長(zhǎng)時間暴露於(yú)光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成後應立即讀取OD值。

8．加入試劑(jì)的順序應一緻，以保證所有反應闆孔溫育的時間(jiān)一樣。

9．按照說明書中标明的時間(jiān)、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

1、血清-----操作過(guò)程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和内毒素的試管。收集血液後，1000×g離心10分鍾将血清和紅(hóng)細胞迅速小心地分離。

2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用於(yú)檢測(cè)。1000×g離心30分鍾去除顆粒。

3、細胞上清液---1000×g離(lí)心10分鍾去除顆(kē)粒和聚合物。

4、保存------如果樣品不立即使用，應将其分成小部分-70 ℃保存，避免反複冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍並(bìng)確(què)保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

1．标準品：标準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前将标準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

2．洗滌(dí)緩沖(chōng)液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

大鼠 (Rat) 白細胞介素-8（IL-8）ELISA 檢測試劑盒操作步驟

1．使用前，将所有試劑(jì)充分混勻。不要使液體産(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，産(chǎn)生加樣上的誤差。

2．根據待測(cè)樣品數量加上标準品的數量決定所需的闆條數。每個标準品和空白孔建議做複(fù)孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用複(fù)孔的盡量做複(fù)孔。

3．加入稀釋好後的标準品50ul於(yú)反應孔、加入待測(cè)樣品50ul於(yú)反應孔内。立即加入50ul的标記的抗體。蓋上膜闆，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4．甩去孔内液體，每孔加滿洗滌(dí)液，振蕩(dàng)30秒，甩去洗滌(dí)液，用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗闆機洗滌(dí)，洗滌(dí)次數增加一次。

5．每孔加入80ul的親和鏈(liàn)酶素-HRP，輕輕振蕩(dàng)混勻，37℃溫育30分鍾。

6．甩去孔内液體，每孔加滿洗滌(dí)液，振蕩(dàng)30秒，甩去洗滌(dí)液，用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗闆機洗滌(dí)，洗滌(dí)次數增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，輕(qīng)輕(qīng)振蕩(dàng)混勻，37℃溫育10分鍾。避免光照。

8．取出酶标闆，迅速加入50ul終止液，加入終止液後(hòu)應立即測(cè)定結果。

9．在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案

局限

6号标準品以上的結果爲非線性的，根據(jù)此标準曲線無法得到精確(què)的結果。

試劑盒性能

1. 靈敏度：小的檢測(cè)濃度小於(yú)1号标準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值爲0.990。

2. 特異(yì)性：不與其它細(xì)胞因子反應。

3. 重複性：闆内、闆間變(biàn)異系數均小於(yú)10%。

結(jié) 果 判 斷(duàn) 與 分 析

1、儀器值：於(yú)波長(zhǎng)450nm的酶标儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值爲縱坐标（Y），相應的IL-8标準品濃度爲橫(héng)坐标（X），做得相應的曲線，樣品的IL-8含量可根據其OD值由标準曲線換(huàn)算出相應的濃度。

3、檢測(cè)值範(fàn)圍：0-800pg/ml

4、敏感度： 1.0 pg/ml