綿羊膠原蛋白III型（Col Ⅲ）酶聯免疫分析試劑盒

本試劑盒僅供研究使用。

檢測範圍：96T

0μg/L -5μg/L

使用目的：

本試劑盒用於(yú)測(cè)定綿羊血清、血漿及相關液體樣本中膠原蛋白III型（Col Ⅲ）含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測(cè)定标本中綿羊膠原蛋白III型（Col Ⅲ）水平。用純化的綿羊膠原蛋白III型（Col Ⅲ）抗體包被微孔闆，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入膠原蛋白III型（Col Ⅲ），再與HRP标記的膠原蛋白III型（Col Ⅲ）抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並(bìng)在酸的作用下轉化成終的。顔色的深淺和樣品中的膠原蛋白III型（Col Ⅲ）呈正相關。用酶标儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值），通過标準曲線計算樣品中綿羊膠原蛋白III型（Col Ⅲ）濃度。 

綿羊膠原蛋白III型（Col Ⅲ）酶聯免疫分析試劑盒組成 

标本要求 

1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放於(yú)-20℃保存，但應避免反複凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1.标準品的稀釋：本試劑盒提供原倍标準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同）、标準孔、待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於酶标闆孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾。   

4.配液：将30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用

5.洗滌：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。

6.加酶：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。 

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鍾.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉）。

11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以内進行。

綿羊膠原蛋白III型（Col Ⅲ）酶聯免疫分析試劑盒操作程序總結：

計算

  以标準物的濃度爲橫(héng)坐标，OD值爲縱坐标，在坐标紙上繪出标準曲線，根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸(guī)方程式，将樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即爲樣品的實際濃度。 

綿羊膠原蛋白III型（Col Ⅲ）酶聯免疫分析試劑盒注意事項

1．試劑盒從(cóng)冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後(hòu)方可使用，酶标包被闆開封後(hòu)如未用完，闆條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌(dí)液可能會(huì)有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌(dí)時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，並(bìng)經常校對其準確(què)性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5分鍾内，如标本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測(cè)定的同時做标準曲線，好做複孔。如标本中待測(cè)物質含量過高（樣本OD值大於(yú)标準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測(cè)定，計算時請後乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封闆(bǎn)膜隻(zhǐ)限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶标儀讀(dú)數爲準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuán)染物處(chù)理。

9．本試(shì)劑(jì)不同批号組分不得混用。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月