豬N端前腦鈉素(NT-proBNP)酶聯免疫分析試劑盒
本試劑盒僅供研究使用。
檢測範圍：96T
60pg/ml - 2000pg/ml
使用目的：
本試劑盒用於測定豬血清、血漿及相關液體樣本中 N端前腦鈉素(NT-proBNP)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中豬 N端前腦鈉素(NT-proBNP)水平。用純化的豬
N 端前腦鈉素(NT-proBNP)抗體包被微孔闆，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入
N端前腦鈉素(NT-proBNP)，再與  HRP标記的  N端前腦鈉素(NT-proBNP)抗體結合，形成抗
體-抗原-酶标抗體複合物，經過*洗滌後加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP  酶的催化下轉
化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的。顔色的深淺和樣品中的        N  端前腦鈉素
(NT-proBNP)呈正相關。用酶标儀在 450nm波長下測定吸光度（OD值），通過标準曲線計算
樣品中豬 N端前腦鈉素(NT-proBNP)濃度。
豬N端前腦鈉素(NT-proBNP)酶聯免疫分析試劑盒組

标本要求
1．标本採集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.  标準品的稀釋：本試劑盒提供原倍标準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。

2.加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同）、标準孔、
待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然後再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度爲 5倍）。加樣将樣品加於酶标闆孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封闆膜封闆後置 37℃溫育30分鍾。
4.配液：将 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋後備用。
5.洗滌：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒後棄去，如此
重複 5次，拍幹。
6.加酶：每孔加入酶标試劑 50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鍾。
10.終止：每孔加終止液    50µl，終止反應（此時藍色立轉）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止
液後 15分鍾以内進行。
豬N端前腦鈉素(NT-proBNP)酶聯免疫分析試劑盒操作程序總結：

計算
2以标準物的濃度爲橫坐标， OD值爲縱坐标，在坐标紙上繪出标準曲線，根據樣品的
OD值由标準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用标準物的濃度與  OD值計算出标
準曲線的直線回歸方程式，将樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，
即爲樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鍾後方可使用，酶标包被闆開封後如未
用完，闆條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好
控制在 5分鍾内，如标本數量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做标準曲線，好做複孔。如标本中待測物質含量過高（樣本  OD值
大於标準品孔di一孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計
算時請後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．封闆膜隻限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶标儀讀數爲準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批号組分不得混用。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書爲準。
豬N端前腦鈉素(NT-proBNP)酶聯免疫分析試劑盒保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃。
2．有效期：6個月