大鼠 (Rat) 白細胞介素-4（IL-4）ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用  标本：血清或血漿
試驗原理：
IL-4試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知IL-4濃度的标準品、未知濃度的樣品加入微孔酶标闆内進行檢測。先将IL-4和生物素标記的抗體同時溫育。洗滌後，加入親和素标記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然後加入底物A、B，和酶結合物同時作用。産生顔色。顔色的深淺和樣品中IL-4的濃度呈比例關系。
大鼠 (Rat) 白細胞介素-4（IL-4）ELISA 檢測試劑盒内容及其配制



自備材料
1．蒸餾水。
2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3．不要用嘴吸取試劑盒裏的任何成份。
大鼠 (Rat) 白細胞介素-4（IL-4）ELISA 檢測試劑盒操作注意事項
1．試劑應按标簽說明書儲存，使用前恢複到室溫。稀稀過後的标準品應丢棄，不可保存。
2．實驗中不用的闆條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3．不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批号的試劑不要混用。保質前使用。
4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5．使用幹淨的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒裏的各種成份及樣品。
6．洗滌酶标闆時應充分拍幹，不要将吸水紙直接放入酶标反應孔中吸水。
7．底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露於光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成後應立即讀取OD值。
8．加入試劑的順序應一緻，以保證所有反應闆孔溫育的時間一樣。
9．按照說明書中标明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和内毒素的試管。收集血液後，1000×g離心10分鍾将血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用於檢測。1000×g離心30分鍾去除顆粒。
3、細胞上清液---1000×g離心10分鍾去除顆粒和聚合物。
4、保存------如果樣品不立即使用，應将其分成小部分-70 ℃保存，避免反複冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準備
1．标準品：标準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前将标準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
1．使用前，将所有試劑充分混勻。不要使液體産生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，産生加樣上的誤差。
2．根據待測樣品數量加上标準品的數量決定所需的闆條數。每個标準品和空白孔建議做複孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用複孔的盡量做複孔。
3．加入稀釋好後的标準品50ul於反應孔、加入待測樣品50ul於反應孔内。立即加入50ul的生物素标記的抗體。蓋上膜闆，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4．甩去孔内液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗闆機洗滌，洗滌次數增加一次。
5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鍾。
6．甩去孔内液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗闆機洗滌，洗滌次數增加一次。
7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鍾。避免光照。
8．取出酶标闆，迅速加入50ul終止液，加入終止液後應立即測定結果。
9．在450nm波長處測定各孔的OD值。
建議使用的實驗方案

局限
6号标準品以上的結果爲非線性的，根據此标準曲線無法得到精確的結果。
大鼠 (Rat) 白細胞介素-4（IL-4）ELISA 檢測試劑盒性能
1. 靈敏度：小的檢測濃度小於1号标準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值爲0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重複性：闆内、闆間變異系數均小於10%。
結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：於波長450nm的酶标儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值爲縱坐标（Y），相應的IL-4标準品濃度爲橫坐标（X），做得相應的曲線，樣品的IL-4含量可根據其OD值由标準曲線換算出相應的濃度。
3、檢測值範圍：0-800pg/ml
4、敏感度： 1.0 pg/ml