牛C反應    （CRP）酶聯免疫分析試劑盒

本試劑盒僅供研究使用。

檢測範圍：96T

35µg/L -1000µg/L

使用目的：本試劑盒用於(yú)測(cè)定牛血清、血漿及相關液體樣本中 C反應（CRP）含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測(cè)定标本中牛 C  反應（CRP）抗體包被微孔闆，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入  C  反應白（CRP），再與 HRP标記的  C反應    （CRP）抗體    ，形成抗體-抗原-酶标抗體複合物，經過*洗滌後加底物 TMB顯色。TMB在   HRP酶的催化下轉化成藍色，並(bìng)在酸的作用下轉化成終的。顔色的深淺和樣品中的  C 反應    （CRP）呈正相關。用酶标儀（CRP）    。用純化的牛 C  反應在 450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值），通過标準曲線計算樣品中牛   C反應（CRP）濃度。

試劑盒組成

牛C反應    （CRP）酶聯免疫分析試劑盒标本要qiu

1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放於(yú)-20℃保存，但應避免反複凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過(guò)（HRP）活性。

牛C反應    （CRP）酶聯免疫分析試劑盒操作步驟

1.  标準品的稀釋：本試劑(jì)盒提供原倍标準品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.  加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同）、标準孔、待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確(què)加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然後再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度爲 5倍）。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封闆膜封闆後(hòu)37℃溫育30分鍾。30倍稀釋後(hòu)備(bèi)用

4.配液：将 30倍濃

5.洗滌(dí)：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌(dí)液，靜重複(fù) 5次，拍幹。30秒後棄去，如此

6.加酶：每孔加入酶标試(shì)劑(jì) 50µl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑(jì) A50µl，再加入顯色劑(jì) B50µl，輕輕震蕩(dàng)混勻，37℃避光顯色10分鍾.

10.終止：每孔加終止液    50µl，終止反應（此時(shí)藍(lán)色立轉）。

11.測(cè)定：以空白空調零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。測(cè)定應在加終止液後 15分鍾以内進行。

牛C反應    （CRP）酶聯免疫分析試劑盒操作程序總：

計算

以标準物的濃度爲橫(héng)坐标， OD值爲縱坐标，在坐标紙上，根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用标準物的濃度與  OD值計算出标準曲線的直線回歸(guī)方程式，将樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即爲樣品的實際濃度。

牛C反應    （CRP）酶聯免疫分析試劑盒注意事項

1．試劑盒從(cóng)冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鍾後(hòu)方可使用，酶标包被闆開封後(hòu)如未用完，闆條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌(dí)液可能會(huì)有析出，稀釋時可在浴中加溫助溶，洗滌(dí)時不影響。

3．各步加樣均應使用加樣器，並(bìng)經常校對其準確(què)性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鍾内，如标本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測(cè)定的同時做标準曲線，做複孔。如标本中待測(cè)物質含量過高（樣本  OD值大於(yú)标準品孔第yi孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測(cè)定，計算時請後乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封闆(bǎn)膜隻(zhǐ)限一次性使用，以避免交叉。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進(jìn)行，試(shì)驗.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuán)染物處(chù)理。

9．本試(shì)劑(jì)不同批号組分不得混用。

保存條件及有效期

1．試(shì)劑(jì)盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月