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1.方法學的影響

ELISA測(cè)定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競争抑制法，其中競争抑制法(HBeAb, HBcAb等採(cǎi)用)因受操作時差所引起的競争等因素的影響，結果重複性較差，質裏較難控制。

2.試劑因素

不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質量一緻，即使是通過批批檢的項目其檢測結果也存在差異，因此必須選擇和訂購長批号的試劑，並(bìng)保證保存條件。嚴格執行這一标準可以避免因試劑批号改變而重新建立質控體系及重新評估試劑的複雜過程，並(bìng)且能夠保證結果的穩定性;對於(yú)效期短、使用率低的試劑，應當小裏分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反複凍融造成試劑的失效。

3.樣本因素

标本幹擾因素包括内源性幹擾因素和外源性幹擾因素，前者包括類風濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體等，後者包括标本溶血、标本被細菌污染、标本貯存時間過長(zhǎng)、标本凝固不全、冷凍标本的反複凍融等。

4.操作因素

ELISA操作步驟複雜，操作不當(dāng)将引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌(dí)、顯色、比色。

5.灰區的設置

通常情況下，ELISA定性實驗以“陽性"和“陰性"來報(bào)告結果，兩者間有-條分界線被稱爲“陽性判斷值"(cut-off value， Co值)，這是定性免疫測(cè)定結果報(bào)告的依據。

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