細胞培養所需添加物
通常細胞體外培養時需要加入血清,以維持細胞的生長(zhǎng)和存活。而除瞭(le)血清之外,部分細胞在培養過程中需要添加胰島素和β-巯基乙醇等成分來維持細胞狀态。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細胞需要額外添加胰島素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細胞則需要添加β-巯基乙醇,不同細胞加入量會有差異,需根據細胞類型判斷。
胰島素作用廣泛,包括調節脂肪和蛋白質的代謝以及促進細胞生長(zhǎng)等。胰島素功能的發揮源於(yú)其對細胞的作用,進而引起組織乃至機體的整體反應。一般可将胰島素在細胞水平的作用分爲三大類:代謝作用、促生長(zhǎng)作用、以及代謝和促生長(zhǎng)混合作用。胰島素對細胞的代謝調節作用主要是通過其與細胞膜上的胰島素受體(Insulin receptor, IR)相互作用而介導,而胰島素對細胞的促生長(zhǎng)作用則是通過其與細胞膜上胰島素樣生長(zhǎng)因子受體(IGF Receptor, IG)相互作用而介導的。在無血清細胞培養液中,常添加胰島素來維持細胞生長(zhǎng),調節細胞對葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的攝取、利用和貯存,同時抑制糖原、蛋白質和脂肪的分解。
細胞生長(zhǎng)分裂的過程中會釋放氧自由基,而氧自由基累積到一定程度會破壞細胞膜和細胞器膜,從而殺死細胞。這使得細胞達很難達到實驗所需的融合度,從而影響實驗的數據。β-巯基乙醇作爲一種強還原,中和細胞培養基中積累的氧自由基從而改善細胞周圍環境。β-巯基乙醇在溶液中不穩定,因此需要定期添加。本公司産(chǎn)品β-巯基乙醇用DPBS稀釋,濃度爲50mM。例如:Thp-1細胞β-巯基乙醇終濃度爲0.05mM,因此使用時需根據細胞培養要求添加。
丙酮酸鈉是最常見的丙酮酸鹽,是一類内源性小分子物質,丙酮酸鈉和丙酮酸均是天然存在於人體内,並(bìng)參與全身各組織和器官的代謝。丙酮酸鈉在醫學上、診斷試劑以及醫療器械中被廣泛用作緩沖劑、賦形劑和抗氧化劑。在人體中行動中大多數細胞隻利用葡萄糖作爲能量的物質就夠瞭(le),而在細胞培養中丙酮酸鈉是必須的物質。丙酮酸鈉在培養基中起到替代碳源的作用,參與細胞營養代謝。Hep G2,Caov-3及 NCI-H1395細胞培養基中就需要額外添加丙酮酸鈉,以維持細胞良好的生長狀态。
保持細胞生長良好狀态的法寶當屬抗生素,适量濃度的的抗生素可有效防止微生物的污染。青mei素-鏈mei素混合溶液(Penicillin-Streptomycin Solution, 100×)是專門用於細胞培養的雙抗,抗菌譜:革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。青mei素-鏈mei素-兩性mei素B混合溶液也是可用於細胞培,抗菌譜:細菌、真菌和酵母。細胞培養需要瞭解不同細胞生長特性,還需要及時補充各類營養物質以保持細胞良好的狀态。