溫育是ELISA測定中影響測定成敗最爲關鍵的一個因素。ELISA作爲一種固相免疫測定，抗原抗體的結合反應在固相上進行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原結合，必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。最爲常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。

因此，關於(yú)溫育，在實際測(cè)定操作中一定要注意以下幾點：

1、要保證在設定的溫度下有足夠(gòu)的反應時間(jiān)。

一般來說，加完樣本和/或反應試劑後，将微孔闆從室溫拿至水浴箱或溫箱中時，孔内溫度從室溫升至37℃，需要一定的時間，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀态下，這段升溫時間可能還比較長，而在臨床實驗室中，很少有人注意這個問題，通常是将微孔闆一放入溫箱即開始計時，這樣就很容易造成實際測定中溫育時間不夠，弱陽性樣本測不出來的問題。曾有一地處南方的血站同行提出瞭(le)一個問題，就是在每一年的冬季總有那麽一個多月的時間，在做HBsAg測定的室内質控中，測定由衛生部臨床檢驗中心供應的1 ng/ml弱陽性樣本時，總是測不出來，不知原因爲何？這可能就與南方冬天室内溫度較低有關，此時微孔闆轉入溫箱後37℃溫育時間不夠，以緻弱陽性樣本測定爲陰性。因此，爲保證37℃下足夠的溫育時間，臨床實驗室可自行確(què)定本實驗室不同季節（不同室溫下）微孔闆從室溫拿至溫箱後需要多長時間孔内溫度才能達到37℃，從而适當延長闆條在溫箱中的放置時間。具體的做法是，用一小溫度計放置闆孔反應溶液中測量觀察即可。 

2、邊緣效應"的排除。

以前在使用96孔闆的ELISA測定中，常發現有“邊緣效應"，即外周孔顯色較中心孔深，産生這種“邊緣效應"的原因可能爲96孔闆周孔與中心孔表面或熱力學特征的不同。但有研究證實在溫育中的熱力學梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身爲不良熱導體，在實驗室的常規ELISA測定中，将闆從室溫（通常在25℃左右）置於(yú)37℃溫箱，闆也升溫時，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學梯度。因此使用水浴或在将反應溶液加入至闆孔中時，将闆和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應"，並(bìng)且可提高測定的重複性。

總而言之，在臨床ELISA測定中，要保證好的測定效果，可採用下述簡單辦法來確保溫育條件，即盡量採用水浴，溫育中讓微孔闆浮於水面上，或将浸透水的沙布放入一大飯盒中成一濕盒，放於溫箱中，這樣就會因爲闆條孔底部直接與37℃水或濕布的接觸，以及水浴箱或濕盒内的高溫度，而使反應溶液的溫度迅速與溫室平衡。