你們細胞是怎麽凍(dòng)存的?求解!!!我的是4度冰箱放半小時,-20度冰箱半小時,然後轉移到-80度冰箱!但是放在-80度冰箱1個月後,細胞複蘇就感覺狀态不太好瞭(le)!!

做實驗前要先學會凍(dòng)存，以備(bèi)自己在後面的實驗中能保持同一來源、穩定可靠的細胞，且可減少污染或其它不利影響。

影響凍存細胞活性的因素

1、細胞凍存保護劑：常用的有二甲基亞砜（DMSO）和甘油，常用的濃度爲5%-10%（90%小牛血清）。DMSO對二倍體細胞的毒性較甘油小。

2、細胞懸液的凍結速度：慢凍時冰凍在細胞外形成，因此不緻損害細胞。多數細胞以每分鍾下降1℃的速度，降至-20℃凍結。均可獲得滿意效果。

3、保存溫度：液氮罐，可達到-196℃，此時所有的物理化學活動均降至zui低限度，以保證細胞長期保存。

4、複蘇：急速融化複蘇可防止損害細胞。凍(dòng)結細胞從(cóng)液氮中取出後，應立即放入37℃~43℃的水浴中，30秒至一分鍾内融化。