很多試劑檢查都涉及到規範曲線的疑問，ELISA試劑盒規範曲線做的好與壞會直接影響到試驗的成果，乃至關系到試驗的成敗，那麽究竟怎麽繪制或規範曲線呢？

一、做規範(fàn)曲線樣品檢查時有幾個(gè)疑問需要注意

1、樣品的濃度等目标是依據規範曲線計算出來的，所以首先要把做規範曲線看作是比做正式試驗還要主要的一件事，不然後邊(biān)的試驗成果無從(cóng)談起。

2、設置規範曲線樣品的規範濃度規模要有一個對(duì)比大的跨度，而且要能包括你所要檢查試驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在規範曲線濃度規模以内，人ELISA試劑盒包括上限和下限。而對(duì)於(yú)呈S型的規範曲線，盡量要使試驗樣品的濃度在中心斜度陡段，即曲線簡直成直線的規模内。

3、選用倍比稀釋法規範(fàn)曲線中的規範(fàn)樣品濃度，這麽就能夠確(què)保規範(fàn)樣品的濃度不會出現較大的違背。

4、檢查規範樣品時，應按濃度遞(dì)加順序進行，以削減高濃度對(duì)低濃度的影響。

5、規範曲線的樣品數通常爲7個點(diǎn)，但少要確(què)保有5個點(diǎn)。

6、做出的規範曲線相數因試驗要求不一樣而有所變(biàn)化，但通常來說，相數R少要大於(yú)0.98，對於(yú)有些試驗，少要0.99乃至是0.999.

二、ELISA試(shì)劑(jì)盒挑選啥方程去拟合

在S曲線的低濃度部分能夠用乘幂方程的拟合，中低濃度部分能夠用直線方程，中心部分可用對數方程，而中後段可用四參(cān)數。免疫檢查時标準點（能夠是倍比稀釋的，也能夠不是）濃度假設和相應的吸光度（OD）值假設能夠出現直線當然是抱負的瞭(le)，這時能夠經過EXELL等利便的取得拟合曲線，進而推算出樣品的濃度值。 

對於(yú)标準曲線的拟合辦法，直線、二次曲線、三次曲線、指數、對數等雖都可用於(yú)ELISA及其它生物學反響中的曲線拟合，但都隻合用於(yú)曲線的一部分，有的合用於(yú)前半段，有的合用於(yú)後半段，有的合用於(yú)中心一段，而Logistic曲線則對曲線的悉數都有較好的合用性。在一個長的區間内，Logistic應當都能拟合得較爲抱負。假設用來定量，S形曲線的中心段（較陡處）是對比好的，而兩真個平整部分計算誤差會大，有時乃至會很大。用於(yú)免疫檢查的所謂“标準曲線"真實稱爲拟合曲線對比适宜。現在國際上盛行的免疫檢查拟合辦法是“四參數邏輯拟合"，用這種拟合辦法通常能夠對比的反映濃度和吸光度的曲線，從而進一步對比的取得樣品中待測物質的濃度值。但咱們做免疫檢查很少有時候能夠有這麽抱負的情況，标品濃度和相應OD值通常是"S"型的曲線，這時就不能用直線拟合的辦法瞭(le)，而對拟合辦法進行挑選即是必要的瞭(le)。

樞紐在於你的标準曲線做到瞭(le)S形的哪一部分，你想檢查的樣品濃度在曲線的哪一部分。當然，假設用於定量，仍是在中心一段較好。但建模型是一回事，而用它來定量是另一回事。這些辦法當然沒有一種辦法能夠通用，但也都能夠用。但並(bìng)不是說它即是的。事實上不僅是ELISA，其它良多生物學反響都是S形曲線，也都能夠用Logistic曲線拟合。

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