1. 紫外消du30min後封閉(bì)紫外燈(dēng)，敞開超淨台正常作業狀況，用酒精消du操作者的雙手。

2. 将所需的培育基，胰酶確保瓶身潔淨後放於作業台面内，點燃酒精燈，将培育基和胰酶瓶口用酒精棉球擦洗後，再将瓶口對準在酒精燈上消du2-3次，旋開瓶蓋後再次分别消du瓶口和瓶蓋，分别放於酒精燈的兩側。特别是将培育基瓶放於斜架上，瓶口對準酒精燈，且放在間隔酒精燈zui近的位置，瓶蓋置於酒精燈的另一側。

3. 将培育瓶瓶口在酒精燈上消du2-3次，旋開後分别再次消du瓶口和瓶蓋2-3次，蓋放於酒精燈右側後将培育瓶内的培育液懸空倒進污缸，在酒精燈消du2-3次瓶口，豎直放好。取1ml移液器快速移動在酒精燈上消du1-2次，然後再裝上槍頭汲取1.5ml胰酶液，懸空移入培育瓶内。

4. 将培育使胰酶浸沒整個瓶壁的細胞層，計時約40s，立馬豎起對著燈火可觀察到細胞與細胞之間有zhen孔樣縫隙，並有1-2個細胞掉落，這時爲胰酶消化的zui适時機。若看到成片的細胞從瓶壁掉落爲胰酶消化過度；若看不到zhen孔樣縫隙和細胞掉落，則需持續消化，悄悄的敏捷平放培育瓶使胰酶浸沒細胞層1s後敏捷豎起對著燈火觀察細胞狀況，可反複幾回，直至出現zhen孔樣縫隙和1-2個細胞掉落的消化狀況。用移液器将胰酶吸淨。

5. 汲取1ml細胞凍存液於培育瓶内，並用移液器汲取少量的培育基輕柔的反複沖洗培育瓶壁5-8次，使貼壁細胞*掉落於培育基内再悄悄吹打2-3次，使細胞盡可能處於單個懸浮狀況。

6. 将1ml含有細胞的凍存液移入新的保種管内，擰緊瓶蓋，做好試驗符号。

7. 将培育基瓶口和瓶蓋消du2-3次後擰緊，平息酒精燈，整理試驗台面，取出試驗試劑及污缸等，封閉超淨作業台。

8. 将保種管先放於4℃冰箱 30min後拿出放置-20℃冰箱過夜，次日再放於-80℃的冰箱内3-4天，zui後存放於-196℃的液氮灌内長時間保存。

    
注此進程也可簡化因實際操作進程中經曆所得：步驟7結束後将保種管用幹脫脂棉包裹後膠帶封好直接放於-80℃冰箱内4-5天，即可放於液氮灌保存。但-80℃冰箱也可保存細胞株2-3月。