1.剖析實驗使用的類型 

一般抗體闡明書都列出該抗體經實驗驗證過适用於何種剖析類型，假如抗體闡明書沒有提及的使用類型，並(bìng)不意味著(zhe)該抗體不适用於此種剖析使用類型，而僅是闡明尚未經過此種剖析實驗驗證，假如抗體不适用某些剖析實驗，則會在抗體闡明書上标注出來不适於某剖析實驗。

2.樣本的物種

應挑選物種相同或有穿插反響的抗體，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有穿插反響，因其氨基酸序列同源性較高，假如樣本的種類未列入抗體闡明書上的穿插反響種屬表中，並(bìng)不意味著(zhe)該抗體不适用於檢測該物種的蛋白，而僅僅表明該物種尚未用此抗體檢測驗證過，應經過序列比對的辦法來猜測穿插反響，可使用Expasy 和 NCBI BLAST來進行不同物種蛋白同源性比對。

3.樣本蛋白的結構性質 

瞭(le)解樣本蛋白的結構性質有助於(yú)挑選*适宜的抗體，至少兩方面因素需求考慮:

1）.待測(cè)樣本蛋白的結構域：抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備(bèi)得來，其中的免疫原包含：全長蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機體（如：細菌）或細胞，抗體闡明書一般都有免疫原的描繪，假如打算檢測(cè)的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長的某一區域，則必須挑選用含此片段域的免疫原制備(bèi)出的抗體。

2）.樣本的提取或處理進程：某些抗體要求樣本經過某些特殊處理，例如：許多抗體隻識别還原和變(biàn)性的、表位已暴露不受二級四級結構阻礙(ài)的蛋白樣本，另一方面，某些抗體僅識别天然折疊狀态的蛋白。

4.一抗宿主物種的挑選 

一般說來，在使用偶聯二抗結合無偶聯物的一抗時，一抗宿主動物的物種挑選較爲重要，關於(yú)免疫組化而言，盡可能挑選與樣本不同種系物種的一抗，從(cóng)而避免二抗與樣本内源性免疫球蛋白發生穿插反響

5.二抗的挑選

二抗應選用與使用的一抗相同的物種來曆，主張檢查二抗闡明書保證該抗體适用於(yú)你的檢測(cè)使用， 二抗一般連接熒光素FITC或發光團。

6.兩層染色抗體的挑選

用未偶聯一抗進行細胞培養物或安排切片的兩層(céng)免疫染色要求一抗來曆於(yú)不同物種而且二抗别離識别其中，二抗闡明書應描繪其與其它物種來曆的免疫球蛋有否有穿插吸附。

7.熒光和化學發光符号 

連接於(yú)二抗的符号物是爲瞭(le)檢測抗體的結合，挑選符号物依賴於(yú)幾個參數：