我們知道，在細胞培養檢測(cè)實驗在實驗儀器、培養基等等工作上都要耗費不少的人力和體力。好在很久以前就有高人發明瞭(le)細胞保存這個實驗步驟，将暫時多出來的細胞冰凍保存，以zui大程度保存細胞活力。

(1)凍存細胞傳統方法: 

冷存管置於(yú)4℃10分鍾--->-20℃30分鍾--->-80℃16～18小時(或隔夜)--->液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止胞内冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

(2)程序降溫：
利用已設定程序的等速降溫機以-1～-3℃/分鍾之速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃，再放在液氮槽vaporphase長期儲存。适用於懸浮型細胞與hybridoma之保存。

凍存細胞步驟：

(1)冷凍前24-48小時更換半量或全量培養基，使細胞處於(yú)指數生長(zhǎng)期。

(2)配制冷凍(dòng)保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養基、血清，逐滴加入二甲基亞砜(DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍(dòng)存液，置於(yú)室溫下待用。

(3)離心收集培養之細胞，用加血清的培養基重懸起細胞，取少量細胞懸浮液(約0.1ml)計(jì)數細胞濃度及凍(dòng)前存活率。

(4)取與細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，並(bìng)晃動試管，制成細胞凍存懸液(DMSOzui後濃度爲5～10%)，使細胞濃度爲1～5×106cells/ml，混合均勻，分裝於(yú)已标示*之冷凍保存管中，1～2ml/vial，並(bìng)取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口後，注明細胞名稱、代數、日期。然後進行凍存。