1、原代細胞組織塊培養法
(1)按照前述方法選材,将組織剪成或切成1mm3巨細的小塊,並(bìng)參(cān)與少量培養基使組織濕潤。
(2)将小塊均勻塗布於(yú)瓶壁,每小塊距離0.2 cm~0.5cm,一般在25mL培養瓶(底面積爲17.5cm2)可接種20~30小塊爲宜,小塊放置後,輕輕翻轉培養瓶,使瓶底朝上,然後於(yú)瓶内參(cān)與适量培養基蓋好瓶塞,将瓶傾斜放置在37℃溫箱内。
(3)培養2~4小時,待小塊貼附後,将培養瓶緩慢翻轉平放,靜置培養,動作要輕,嚴禁搖擺(bǎi)和來回振蕩,以防因爲激動而使小塊漂起而形成培養失利,若組織塊不易貼壁可預先在瓶壁塗一薄層(céng)血清、胎汁或鼠尾膠原等。
2.消化培養(yǎng)法
該方法是選用前述的消化松散法,原代細胞将阻止細胞生長的細胞間質(包含基質、纖維等)去除,使細胞松散形成細胞懸液,然後分瓶培養。
3.懸浮細胞培養法
關於(yú)懸浮生長的細胞,如白血病細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和**細胞無需消化,可選用低速離心别離,直接培養,或經細胞分層(céng)液别離後接種培養。