當抗原材料中的幹擾物質不易除掉，或不易得到足夠的純(chún)化抗原時，可用此法檢測(cè)特異性抗體。其原理爲标本中的抗體和一定量的酶标抗體競賽與固相抗原結合。

标本中抗體量越多，結合在固相上的酶标抗體愈少，因此陽性反響呈色淺於(yú)陰性反響。如抗原爲高純度的，可直接包被固相。如抗原中會有幹擾物質，直接包被不易成功，可選用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應的抗體，然後參(cān)加抗原，構成固相抗原。

洗刷除掉抗原中的雜質，然後(hòu)再加标本和酶标抗體進行競賽結合反響。競賽法測(cè)抗體有多種形式，可将标本和酶标抗體與固相抗原競賽結合，抗HBc 。

ELISA一般選用此法。另一種形式爲将标本與抗原一起參加到固相抗體中進行競賽結合，洗刷後再參加酶标抗體，與結合在固相上的抗原反響。抗HBe的檢測一般選用此法。 
 
小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，能夠選用競賽法形式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原競賽與固相抗體結合。标本中抗原量含量愈多，結合在固相上的酶标抗原愈少，終的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。