（一） 顯色

顯色是ELISA中的後一步溫育反應，此時酶催化無色的底物有色的産(chǎn)物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間内，陰性孔可保持無色，而陽性孔則随時間的延長(zhǎng)而呈色加強。

适當提高溫度有助於(yú)加速顯色進行。在定量測定中，加入底物後的反應溫度和時間應按規定力求準確(què)。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯se情況适當縮短或延長反應時間，及時判斷。

OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鍾後即不再加深，再延長反應時間，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變(biàn)色，顯色反應應避光進行，顯色反應結束時加入終止液終止反應。OPD産(chǎn)物用硫酸終止後，顯色由橙轉向棕。

TMB受光照的影響不大，可在室溫中置於(yú)操作台上，邊(biān)反應觀察結果。但爲保證實驗結果的穩定性，宜在規定的适當時間閱讀結果。TMB經HRP作用後，約40分鍾顯色達，随即逐漸減弱，至2小時後即可*消退至無色。

TMB的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基*（SDS）等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間（12-24小時）不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會使藍色轉變(biàn)成，此時可用特定的波長（450nm）測(cè)讀吸光值。

（二）比色

比色前應先用潔淨的吸水紙拭幹闆底附著(zhe)的液體，然後将闆正確放入酶标比色儀的比色架中。以軟闆爲載體的試驗，需先将闆置於(yú)标準96孔的座架中，才可進行比色。

在加底物液顯色前，先将軟闆邊(biān)緣剪淨，這樣，此闆就可*平妥坐入座架中。 比色時應先以蒸餾水校零點，測(cè)讀底物孔（未經任何反應僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替标本作全過程的孔），以記錄本次試驗的試劑狀況。

其後(hòu)可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn)，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然後(hòu)進行計算。

比色結果的表達以往通用光密度（oplical density，OD），現按規定用吸光度（absorbence，A），兩者含義相同。通常的表示方法是，将吸收波長(zhǎng)寫於(yú)A字母的右下角，如OPD的吸收波長(zhǎng)爲492nm，表示方法爲"A492nm"或"OD492nm"。