實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RealTime PCR)技術服務

實時熒光定量PCR技術即是在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信号實時監測(cè)整個PCR進程，後通過标準曲線對(duì)未知模闆進行定量分析的方法。

實時熒光定量PCR避免瞭(le)傳統PCR以終産物檢測定量産生的偏差，提高實驗的重複性。該技術已被廣泛用於(yú)檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的 mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA幹擾的實驗結果等。

SYBR Green熒(yíng)光染料法

SYBR Green是一種DNA結合染料，能非特異地摻(càn)入到雙鏈DNA中去。在遊離狀态下，它不發(fā)出熒光，但一旦結合到雙鏈DNA中以後，便可以發(fā)出熒光。

它的大優點就是可以與任意引物、模闆相配合，用於(yú)任意反應體系中。從(cóng)經濟角度考慮，它也比其它的探針的價格要便宜得多。但由於(yú)它能與所有的雙鏈DNA結合，所以一旦反應體系中出現非特異擴增，那它就會影響到定量結果的可靠性與重複性。

要避免這種不利因素，可以通過(guò)選擇良好的引物並(bìng)優化反應條件以消除非特異性影響。

TaqMan熒光探針法

PCR擴增時在加入一對(duì)引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針爲一寡核苷酸，兩端分别标記一個報(bào)告熒光基團和一個淬滅熒光基團。

探針完整時，報(bào)告基團發射的熒光信号被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5-3外切酶活性将探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測(cè)系統可接收到熒光信号。

即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現瞭(le)熒光信号的累積與PCR産(chǎn)物形成*同步。