我們在做一項實驗的時候，需要瞭(le)解的步驟與所需物品是*的。而今天，上海酶聯這裏要給朋友們分享的就是實驗制得細胞的樣本，您需做好下文中的這六步兩注意。所謂的六步兩注意也就是操作的六個(gè)步驟，和兩條注意事項，下面我們就來詳細的看看吧。

實驗之前，我公司的技術人員爲朋友們特别準備說明瞭所需的物品有哪些：
1、培養基；不含酚紅的DMEM培養基
2、處理玻片：将多聚賴氨酸溶液（溶於1mol/L pH7.0 Tris-HCl緩沖液中），塗布於玻片上，幹燥後即可使用。或者APES 2ml溶於100ml丙酮中，将玻片浸泡入内，取出晾幹，180℃幹燥備用。
3、洗滌液；0.1M，pH7.2～7.4PBS
4、細胞固定液：4%多聚甲醛0.1MPBS(pH7.2～7.4)含有1/1000 DEPC。
5、乙醇：70%  90%  100%
6、胃蛋白酶溶液：用0.1N HCl将其稀釋爲100μg/ml
7、設備：烤箱，CO2培養箱，倒置顯微鏡，玻璃載玻片，原位雜交蓋玻片，溫箱，加樣器和吸頭等。
操作步驟：
1、在37℃ 5% CO2條件下将細胞加在處理的載玻片上，用培養基培養，時間通過預實驗確定；
2、細胞長好後，用洗滌液洗2分鍾×3次，室溫下将其放入細胞固定液中固定30-60min，蒸餾水洗滌；
3、室溫下用洗滌液充分洗滌固定細胞，（幹燥後-20℃冰凍保存2周以上）
4、雜交前将固定的細胞進行如下處理；依次在70%，90%，100%的乙醇中浸泡，脫水每次5min，用二甲苯洗滌，除去殘留脂質依次在100%，90%，70%乙醇中浸泡，進行再水化，每次5min，zui後浸泡於洗滌液中；
5、在37℃用胃蛋白酶溶液10min處理固定的細胞，以增加細胞對大分子試劑的通透性，再用洗滌液洗5min；
6、用1%甲醛固定10min，用洗滌液洗淨。
注意！
    1、所有溶液都必須用RNA酶抑制劑處理。
    2、操作中重要的是及時固定，並在固定液中加入0.1%的DEPC處理，以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外，過度固定對原位雜交有明顯的不利影響。