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新手必須(xū)知道的Elisa的實(shí)驗步驟
更新時間:2019-03-08   點(diǎn)擊(jī)次數:2108次

進口ELISA試劑盒基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶标記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶标記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢标本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與液體中的其他物質分開。再加入酶标記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與标本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物後,底物被酶催化成爲有色産物,産物的量與标本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由於(yú)酶的催化效率很高,間接地放大瞭(le)免疫反應的結果,使測定方法達到很高的敏感度。

進(jìn)口ELISA試劑(jì)盒操作步驟:

1.從(cóng)已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需闆條,未用的闆條和幹(gàn)燥劑請放回鋁箔袋内壓 實自封條,密封口袋,放回4℃。

2.空白孔加标準品和标本稀釋液,其餘相應孔中加标本或不同濃(nóng)度标準品(100ul/孔),用封闆膠(jiāo)紙封住反應孔,36℃孵箱孵育90分鍾。

3.提前20分鍾準備(bèi)生物素化抗體(tǐ)工作液。

4.洗闆5次。

5.空白孔加生物素化抗體稀釋(shì)液,其餘孔加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用新封闆膠(jiāo)紙封住反應孔,36℃孵箱孵育60分鍾。

6.提前20分鍾準備(bèi)酶結(jié)合物工作液。避光室溫(22-25 ) ℃ 放置。

7.洗闆5次。

8.空白孔加酶結(jié)合物稀釋液,其餘孔加入酶結(jié)合物工作液(100ul/孔)。用新封闆膠(jiāo)紙封住反應孔,36℃孵箱,避光孵育30分鍾。

9.打開酶标儀電(diàn)源,預熱儀器,設置好檢測(cè)程序。

10.洗闆5次。

11.加入顯(xiǎn)色底物(TMB)100ul/孔,避光36℃孵箱,避光孵育15分鍾(zhōng)。

12.加入終止液100ul/孔, 混勻後即刻測(cè)量OD450值(3分鍾内)。在儀器保存讀數結果並(bìng)打印一份紙質結果。

13.進口ELISA試劑盒實驗完畢(bì)後将未用完的試劑按規定的保存溫度放回電冰箱保存至有效期結束。 建議保存酶标闆框,以備(bèi)下次或者今後試驗使用。

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