每個實驗都有自己的規則以及注意點,elisa實驗也不例外,對於(yú)elisa實驗如此條件嚴格的,那麽如何才能保障elisa實驗的正常進行呢,下面操作人員的技術要求,的確(què)是如此,下面就是elisa實驗時索要注意的問題。
ELISA實驗操作18條要點:
1、要保證移液槍的準確性,誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行確定。但hao有專業人員進行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體後,要更換槍頭。即使是吸取标準品時。
3、要在實驗前1小時将試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢複到室溫,以使結果更穩定。
4、實驗時,要使底物避光保存。
5、用槍吸取液體時速度不能太快,以免産生氣泡而使吸取量不準確。
6、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
7、将液體加到酶标孔中時,避免槍頭和孔内液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
8、液體全部加完後,可将酶标闆在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶标儀的晃動功能。
9、溫浴時,要用不幹膠或膠帶紙封好酶标闆,防止水分的蒸發。
10、洗闆時,每次洗液加入後,應靜置1分鍾,使清洗更加*。沒有洗闆機時,倒去液體後,要将酶标闆在報紙或毛紙上用力拍幹。
11、洗液不夠時,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作爲洗液。加入1/1000的疊氮鈉後可長期保存。
12、底物是光敏感的,要在臨用前現配。
13、檢測前,要打開酶标儀,使之穩定10分鍾以上。
14、底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應盡量避免接觸。
15、待檢樣品要澄清,否則會影響結果。
16、溫浴時間應遵守試劑盒規定。
17、應盡量做雙孔實驗,這樣才能保證數據的準確性。
18、對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。